制備色譜到底是什么(me)?
(1)分(fen)析(xi)色譜(pu)的目(mu)的，是分(fen)析(xi)出(chu)混合物(wu)(wu)中一個(或者(zhe)幾個)純物(wu)(wu)質的含量。制備色譜(pu)的目(mu)的，是從混合物(wu)(wu)中得到純物(wu)(wu)質。
為了加(jia)快分(fen)離(li)(li)的(de)(de)(de)(de)(de)時間與提高分(fen)離(li)(li)的(de)(de)(de)(de)(de)效率(lv)，制(zhi)(zhi)(zhi)備色(se)譜(pu)(pu)(pu)的(de)(de)(de)(de)(de)的(de)(de)(de)(de)(de)進樣品量很(hen)大(da)，導(dao)致制(zhi)(zhi)(zhi)備色(se)譜(pu)(pu)(pu)柱子的(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)離(li)(li)負(fu)荷的(de)(de)(de)(de)(de)相應加(jia)大(da)，也就(jiu)必須加(jia)大(da)色(se)譜(pu)(pu)(pu)柱填料(liao)，增(zeng)大(da)制(zhi)(zhi)(zhi)備色(se)譜(pu)(pu)(pu)的(de)(de)(de)(de)(de)直(zhi)徑和長(chang)度，使用的(de)(de)(de)(de)(de)相對多的(de)(de)(de)(de)(de)流動(dong)相。
然而，當色(se)譜(pu)柱(zhu)上(shang)樣品負(fu)載加大(da)的(de)(de)時候(hou)，往往導致柱(zhu)效急劇下降而得(de)不到(dao)純的(de)(de)產(chan)品。制備(bei)色(se)譜(pu)，要(yao)(yao)解決(jue)容量與(yu)柱(zhu)子效果(guo)之(zhi)間的(de)(de)矛盾，對重(zhong)現性也(ye)要(yao)(yao)考慮。從經濟上(shang)來(lai)說。制備(bei)色(se)譜(pu)要(yao)(yao)爭(zheng)取少用填(tian)料，少用溶劑(ji)，要(yao)(yao)盡可能多的(de)(de)得(de)到(dao)產(chan)品。
(2)樣品的前處理：
制備色譜柱(zhu)子(zi)由(you)于處理的(de)樣品多(duo)，比分析柱(zhu)子(zi)更容易(yi)受污染，所以(yi)，必要(yao)的(de)前(qian)處理就(jiu)顯得(de)必要(yao)。萃(cui)取、過(guo)濾、結(jie)晶、固相(xiang)萃(cui)取等簡單的(de)分離方法，如果用得(de)上，而且還不(bu)是很(hen)麻煩，就(jiu)要(yao)盡可能(neng)多(duo)的(de)采(cai)用以(yi)去掉雜質。
(3)固(gu)定相的選(xuan)擇
硅膠、鍵合固(gu)定(ding)相(如C18)、離子交換(huan)樹脂(zhi)、聚酰胺、氧化鋁、凝膠等都可以作為色(se)譜柱的填(tian)料(liao)(liao)。 有不少(shao)文獻報道，對(dui)填(tian)料(liao)(liao)可以進行(xing)一下處理提高了分(fen)離效果，如，對(dui)硅膠進行(xing)的硝(xiao)酸銀(yin)(或緩沖液)處理。
(4)裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)柱(zhu)(zhu)方法(fa)(fa)的(de)選擇 根據(ju)固定相(xiang)(xiang)顆(ke)(ke)粒(li)度(du)和柱(zhu)(zhu)子(zi)的(de)尺(chi)寸，采(cai)用(yong)(yong)不同(tong)的(de)裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)柱(zhu)(zhu)方法(fa)(fa)，往往裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)填(tian)(tian)(tian)越好分(fen)離效(xiao)果越好。裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)柱(zhu)(zhu)效(xiao)果跟填(tian)(tian)(tian)料的(de)顆(ke)(ke)粒(li)度(du)關系很大，顆(ke)(ke)粒(li)度(du)的(de)減少(shao)會導致裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)柱(zhu)(zhu)的(de)難度(du)。一(yi)般來說，顆(ke)(ke)粒(li)直徑小于20-30um的(de)固定相(xiang)(xiang)采(cai)用(yong)(yong)濕法(fa)(fa)裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)填(tian)(tian)(tian)。所(suo)謂(wei)“敲(qiao)擊-裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)填(tian)(tian)(tian)”技術適用(yong)(yong)于顆(ke)(ke)粒(li)直徑大于25um的(de)固定相(xiang)(xiang)。濕法(fa)(fa)的(de)目(mu)的(de)是(shi)迫使相(xiang)(xiang)對(dui)稀松的(de) 固定相(xiang)(xiang)懸漿以高速裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)入色(se)譜柱(zhu)(zhu)子(zi)，從而(er)減少(shao)空隙的(de)形成。然而(er)，當柱(zhu)(zhu)直徑大于20mm，所(suo)加壓(ya)力為30-40bar時(shi)，高壓(ya)懸漿裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)填(tian)(tian)(tian)技術就變(bian)得(de)十分(fen)復雜(za)。為將小顆(ke)(ke)粒(li)固定相(xiang)(xiang)裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)入更大得(de)制備(bei)型色(se)譜柱(zhu)(zhu)，可采(cai)用(yong)(yong)柱(zhu)(zhu)長(chang)壓(ya)縮技術。這種方法(fa)(fa)，先將固定相(xiang)(xiang)懸漿(或偶爾是(shi)干填(tian)(tian)(tian)充物)裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)入柱(zhu)(zhu)中加壓(ya)，利用(yong)(yong)物理方法(fa)(fa)將其(qi)壓(ya)緊。壓(ya)緊的(de)方法(fa)(fa)有兩種：徑向(xiang)(xiang)壓(ya)縮和軸向(xiang)(xiang)壓(ya)縮。 濕法(fa)(fa)裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)(zhuang)柱(zhu)(zhu)需要一(yi)定的(de)設備(bei)，在柱(zhu)(zhu)子(zi)填(tian)(tian)(tian)完后，應(ying)用(yong)(yong)有柱(zhu)(zhu)效(xiao)的(de)測(ce)量，對(dui)柱(zhu)(zhu)效(xiao)低(di)的(de)柱(zhu)(zhu)子(zi)應(ying)該重(zhong)填(tian)(tian)(tian)。
(5)流(liu)動(dong)相的選擇
除了(le)和分析色譜同樣的考慮外，在選(xuan)用流動相時，要考慮色譜分離(li)后面加有旋轉蒸發等二次分離(li)操作。一般來(lai)說，不(bu)宜(yi)采用高(gao)毒性溶劑(ji)，對多元溶劑(ji)要盡(jin)可(ke)能的少用。
如果產品中(zhong)含有大(da)量(liang)溶劑，溶劑的純度也(ye)要考慮在其中(zhong)。
(6)加樣的方法
可以采用(yong)以下(xia)方法(fa)之一進(jin)(jin)樣(yang)。-用(yong)注射器進(jin)(jin)樣(yang)-用(yong)旋(xuan)轉閥(fa)進(jin)(jin)樣(yang)-通(tong)過(guo)六通(tong)閥(fa)進(jin)(jin)樣(yang)-通(tong)過(guo)主泵進(jin)(jin)樣(yang)-通(tong)過(guo)輔泵進(jin)(jin)樣(yang)-固體上樣(yang)
(7) 泵的選用
生產(chan)制備(bei)色(se)譜(pu)泵的廠商很(hen)多。根(gen)據有無脈沖、能承受的*大壓力、控制的精度、售后服(fu)務等(deng)來選擇泵。
(8)檢測(ce)器的選(xuan)用
一(yi)般的(de)分析(xi)池的(de)*大(da)允許流速僅為5 mL/min 或者10mL/min。而專門的(de)(de)制備池的(de)(de)*大允許流速可為150mL/min。有時，采(cai)用旁路分離管，將少量流體導(dao)入分析池進行檢(jian)測，是一(yi)個不錯(cuo)的辦法，但其濃度的誤差會相對較大。
(9)組分保(bao)留時(shi)間的估計
用分(fen)(fen)析柱(zhu)子在同等(deng)色譜條件下(xia)(同樣(yang)的固定(ding)(ding)相和流(liu)動相)測定(ding)(ding)保留時間后，按(an)照單一(yi)(yi)組(zu)分(fen)(fen)的線流(liu)速(su)(不是(shi)體積(ji)流(liu)速(su))一(yi)(yi)定(ding)(ding)，通過計算可以知(zhi)道(dao)組(zu)分(fen)(fen)的大致保留時間區域。
分析譜圖的峰形狀，對確(que)定保留(liu)時(shi)間也有很大的參考價值。
(10)產品的收(shou)集
手工(gong)餾分收集費時費力(li)，自動餾分收集器有很大的方便。許多實驗室和工(gong)廠都采用了(le)餾分收集器。
(11)超載(zai)、邊緣切(qie)割(ge)、中心切(qie)割(ge)、放大(da)技術與非線性效用(yong)
在(zai)制備色譜(pu)中，因(yin)為沒有必(bi)要達(da)到(dao)分析(xi)色譜(pu)那樣(yang)的分離度(du)，可以在(zai)一(yi)定范圍(wei)內大大加大進樣(yang)的濃度(du)和體積。在(zai)做分離的時候，也有一(yi)些分析(xi)色譜(pu)的時候，不能用到(dao)的技巧。因(yin)為篇(pian)幅(fu)關系(xi)，不在(zai)這里(li)敘(xu)述。
(12)比(bi)較(jiao)新(xin)的制備色譜技術
模擬移動床(chuang)可(ke)以連(lian)續(xu)進(jin)樣，并可(ke)以利(li)用(yong)邊緣切割(ge)效用(yong)，而(er)且采(cai)用(yong)了(le)柱切換(huan)技(ji)(ji)術(shu)，能更好的利(li)用(yong)溶劑和填(tian)料，已經應用(yong)于(yu)工業化生(sheng)產。其理論和技(ji)(ji)術(shu)也日(ri)益完善(shan)。
迎頭色(se)譜(pu)(pu)、超臨界流(liu)(liu)體色(se)譜(pu)(pu)、逆流(liu)(liu)色(se)譜(pu)(pu)環(huan)形色(se)譜(pu)(pu)、氣(qi)相制備色(se)譜(pu)(pu)等(deng)在科研和工(gong)業生產(chan)中(zhong)也得到了應(ying)用。
(13)柱(zhu)轉(zhuan)換技術
通(tong)過接頭(tou)或者閥門，實(shi)現柱子的簡單延長，或者比較方(fang)便地實(shi)現對其中一個(ge)(或幾個(ge))組分(fen)的精制。
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